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胚胎移植

     胚胎移植又称受精卵移植,就是将1头母畜(供体)的受精卵移植到另一头母畜(受体)的子宫内,使之正常发育,俗称“借腹怀胎”。
  (一)胚胎移植的意义
  1.充分发挥优良母牛的繁殖潜力 一般情况下,1头优良成年母牛一年只能繁殖1头犊牛,应用胚胎移植技术,一年可得到几头至几十头优良母牛的后代,大大加速了良种牛群的建立和扩大。
  2.诱发肉牛产双胎 对发情的母牛配种后再移植一个胚胎到排卵对侧子宫角内。这样配种后未受孕的母牛可能因接受移植的胚胎而妊娠,而配种后受母牛则由于增加了一个移植的胚胎而怀双胎。另外,也可对未配种的母牛在两侧子宫角各移植一个胚胎而怀双胎,从而提高生产效率。 
  3.应用胚胎移植还可以减少肉用繁殖母牛的饲养头数,可以代替种畜的引进和保存品种资源等。
  (二)胚胎移植的生理基础
  1.母牛发情后生殖器官的孕向发育 在发情后的最初一段时期(周期性黄体期),不论是否已受精,母牛生殖系统均处于受精后的生理状态之下,在生理现象上,妊娠与未孕并无区别。所以,发情后的母牛生殖器官的孕向变化,是进行胚胎移植时使不配种的受体母牛可以接受胚胎,并为胚胎发育提供各种条件的主要生理学依据。
  2.早期胚胎的游离状态 胚胎在发育早期有相当一段时间(附植之前)是独立存在的,它的发育基本上靠本身贮存的养分,还未和子宫建立实质性联系。所以,在离开活体情况下,在短时间内可以存活。当放回与供体相同的环境中,即可继续发育。
  3.胚胎移植不存在免疫问题 受体母畜的生殖道(子宫和输卵管)对于具有外来抗原物质的胚胎和胎膜组织,一般来说,在同一物种之内,并没有免疫排斥现象,这一点对胚胎由一个体移植给另一个体后而继续发育极为有利。
  4.胚胎和受体的联系 移植的胚胎,在一定时期会和受体子宫内膜建立生理上和组织上的联系,从而保证了以后的正常发育。此外,受体并不会对胚胎产生遗传上的影响,不会影响胚胎固有的优良性状。 
  (三)胚胎移植的操作原则
  1.胚胎移植前后所处环境的一致性 即胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应。包括生理上的一致性(即供体和受体在发情时间上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎与移植前所处的空间环境的相似性)以及种属一致性(即供体与受体应届同一物种,但并不排除种间移植成功的可能性)。
  2.胚胎收集期限 胚胎收集和移植的期限(胚胎的日龄)不能超过周期黄体的寿命,最迟要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常是在供体发情配种后3一s日内收集和移植胚胎。
  3.在全部操作过程中,胚胎不应受到任何不良因素(物理的、化学的、微生物的)的影响而危及生命力。移植的胚胎必须经鉴定并认为是发育正常者。
  (四)胚胎移植的基本程序 胚胎移植的基本程序包括供体超排与授精,受体同期发情处理、采卵、检卵和移植。关于超排和同期发情处理在前面已有叙述,本书仅介绍采卵、检卵和移植。
  1.胚胎回收(采卵) 从供体收集胚胎的方法肴手术法和非手术法两种。
  (1)手术法 按外科剖腹术的要求进行术前准备。手术部位位于右肋部或腹下乳房至脐部之间的腹白线处切开。伸进食指找到输卵管和子宫角,引出切口外。如果在输精后3—4天期间釆卵,受精卵还未移行到子宫角,可采用输卵管冲卵的方法。将一直径2毫米,长约10厘米的聚乙烯管从输卵管腹腔口插入2—3厘米,另用注射器吸取5—10毫升30℃左右冲卵液,连接7号针头,在子宫角前端刺人,再送人输卵管峡部,注入冲卵液。穿刺针头应磨钝,以免损伤子宫内膜;冲洗速度应缓慢,使冲洗液连续地流出。如果在输精后5天收胚,还必须做子宫角冲胚。即用10一15毫升冲卵液由宫管结合部子宫角上部向子宫角分叉部冲洗。为了使冲卵液不致由输卵管流出,可用止血钳夹住宫管结合部附近的输卵管,在于宫角分叉 部插入回收针,并用肠钳夹住子宫与回收针后部,固定回收针,并使冲卵液不致流人子宫体内。
  (2)非手术法 非手术采卵一般在输精后5—7天进行。可采用二路导管的冲卵器。二路式冲卵器是由带气囊的导管与单路管组成。导管中一路为气囊充气用,另一路为注入和回收冲卵液用。
  导管中插1根金属通杆以增加硬度,使之易于通过子宫颈。一般用直肠把握法将导管经子宫颈导人子宫角。为防止子宫颈紧缩及母牛努责不安,采卵时可在腰荐或尾椎间隙用2%的普鲁卡因或利多卡因5—10毫升进行硬膜外腔麻醉。操作前清洗外阴部并用酒精消毒。为防止导管在阴道内被污染,可用外套膜(有商品出售)套在导管外,当导管进人子宫颈后,扯去套膜。将导管插入一侧子宫角后,从充管向气囊充气,使气囊胀起并触及子宫角内壁,以防止冲卵液倒流。然后抽出通杆,经单路管向子宫角注入冲卵液,每次15—50毫升,冲洗5—6次,并将冲卵液收集在漏斗形容器中。为更多地回收冲卵液,可在直肠内轻轻按摩子宫角。用同样方法冲洗对侧子宫角。
  冲卵液多数为组织培养液,如林格氏液、杜氏磷酸盐缓冲液(PE)、布林斯特氏液(BMOC-3)和TCM—199等。常用的为杜氏磷酸盐缓冲液,加入0.4%的牛血清白蛋白或1%一10%犊牛血清。
  冲卵液温度使用时应为35—37℃,每毫升要加入青霉素1000国际单位,链霉素500—1000微克,以防止生殖道感染。
  2.胚胎检查
  (1)检卵 将收集的冲卵液于37℃温箱内静置10一15分钟。胚胎沉底后,移去上层液。取底部少量液体移至平皿内,静置后,在实体显微镜下先在低倍(10一20倍)下检查胚胎数量,然后在较大倍数(50—100倍)下观察胚胎质量。
  (2)吸卵 吸卵是为了移取、清洗、处理胚胎,要求目标准确,速度快,带液量少,无丢失。吸卵可用1毫升的注射器装上特别的吸头进行,也可使用自制的吸卵管。
  (3)胚胎质量鉴定 正常发育的胚胎,其中细胞(卵裂球)外形整齐,大小一致,分布均匀,外膜完整。无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。
  3.胚胎移植
  (1)手术移植 先将受体母牛作好术前准备。已配种母牛,在右肋部切口,找到非排卵侧子宫角,再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宫角前端,注人胚胎;未配母牛在每侧子宫角各注入一个胚胎;然后将子宫复位,缝合切口。
  (2)非手术移植 非手术移植一般在发情后第六至第九天(即胚泡阶段)进行,过早移植会影响受胎率。在非手术移植中采用胚胎移植枪和0.25毫升细管移植的效果较好。将细管截去适量,吸入少许保存液,吸一个气泡,然后吸人含胚胎的少许保存液,吸人一个气泡,最后再吸取少许保存液。将装有胚胎的吸管装入移植枪内,通过子宫颈插入子宫角深部,注入胚胎。非手术移植要严格遵守无菌操作规程,以防生殖道感染。

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